Lors de cette première saison officielle, le club, bien que créé en 1897, avec Enrico Canfari comme président (également l'un des créateurs de l'équipe), et après s'être inscrit auprès de la FIF (Fédération d'Italie de football), participe pour la première fois au III Campionato Federale di Prima Categoria (3e championnat fédéral de première catégorie, l'ancêtre de la Serie A), championnat tenu depuis deux saisons et commencé en 1898.
L'équipe piémontaise (après quelques matchs amicaux joués au cours des années précédentes) s'apprête donc là à jouer les premiers matchs officiels de son histoire au printemps de l'année 1900.
Dans un groupe composé de trois équipes turinoises (le Girone Eliminatorio Piemontese), la Juve joue en tout quatre matchs en commençant par jouer les éliminatoires régionales du championnat. Le club débute donc cette phase éliminatoire lors de la deuxième journée le à Piazza d'Armi (premier match en compétition officielle du club) lors d'une défaite 1-0 contre le FBC Torinese.
Les banconeri à leurs débuts officiels en championnat, avec la chemise rose et cravate noire, le 11 mars 1900.
Une semaine plus tard, le , la Juventus gagne son premier match officiel en battant par 2-0 le Ginnastica Torino. Le 1er avril, le club s'impose à nouveau 2-0 contre le Ginnastica pour le match retour, avant de perdre son dernier match contre le FBC Torinese 2-1, ce qui élimine l'équipe de Turin des qualifications régionales.
Les Bianconeri finissent donc la saison à la deuxième place derrière le FBC Torinese, et ne réussit donc pas à se qualifier pour le tour suivant.
Le club remporte néanmoins cette année-là une coupe amateur, la Coppa del Ministero della Pubblica Istruzione[3] (Coupe du ministère de l'instruction publique) au mois d'avril contre le Ginnastica Torino.
Le 6 mai, l'effectif rosanero participe à nouveau à une coupe amicale, la Coppa Studenti Torino (Coupe des étudiants de Turin), lors d'un match contre une équipe d'étudiants de Médecine (score final de deux buts partout).