Share to: share facebook share twitter share wa share telegram print page

Izolace DNA

Izolace DNA je proces získání DNA ze zkoumaného vzorku pomocí kombinace fyzikálních a chemických metod. Získaná DNA slouží například pro forenzní biologii nebo rekombinantní DNA technologie. DNA byla poprvé izolována roku 1869 Friedrichem Miescherem,[1] v současné době se jedná o rutinní techniku molekulární biologie.

Základní postup izolace DNA

  • Lýze buněk, která zajišťuje rozbití buněčné stěny a uvolní DNA. Používá se kombinace fyzikálních a chemických postupů. Důležitou roli hraje využití detergentů, které rozrušují membrány. V případě buněk s pevnými buněčnými stěnami musí dojít k enzymatickému nebo mechanickému rozrušení.
  • Enzymatické odstranění RNA pomocí RNáz, případně i rozštěpení proteinů proteázami.
  • Přečištění DNA od detergentů a ostatních složek lyzačního roztoku, proteinů, solí a dalších nečistot
    • Srážení alkoholem, nejčastěji ethanolem nebo isopropanolem, ve kterých DNA není rozpustná a je možné izolovat centrifugací. Pro efektivní srážení se často zvyšuje iontová síla přidáním octanu sodného nebo jiné soli
    • Fenol-chloroformová extrakce, při které se ke vzorku přidá fenol denaturující proteiny, které se vysráží na mezifázi vytvářené mezi fenolovou a vodnou fází. Zbytky fenolu jsou odstraněny přidáním chloroformu, který se pro svou vysokou hustotu snadno odděluje od vodné fáze. Pro izolaci DNA se využívá fenol v bazickém pufru, ve kterém RNA není stabilní.
    • Izolace pomocí minikolony využívající schopnost DNA vázat se na sklo nebo křemelinu v přítomnosti chaotropních solí, kterou jsou schopny vytvářet vazby zároveň se záporně nabitým sklem i záporně nabitou DNA. Po promytí ethanolem obsahujícím chaotropní soli a odstranění nečistot může být DNA uvolněna vodou nebo vhodným pufrem
  • Po izolaci je DNA obvykle uchovávána v ultračisté vodě nebo ve vhodném pufru. Nejčastěji se používá slabě alkalický TE pufr, který obsahuje Tris udržující pH kolem 8 a EDTA chelatující dvoumocné kationty, které jsou nezbytné pro funkci DNáz a tak stabilizuje vzorek.

Zvláštní případy izolace DNA

Podle typu vzorku, ze kterého probíhá izolace DNA, a podle požadované čistoty získané DNA, musí být zvolena vhodná technika izolace. Typickými vzorky, které jsou obtížně zpracovatelné a musí být pro ně využívána specifická technika, jsou například

  • archeologické vzorky obsahující starou, částečně degradovadou DNA
  • vzorky obsahující inhibitory PCR, například humusové kyseliny z půdy, indigo používané k barvení džínů nebo hemoglobin z krve
  • vzorky z mikroorganismů s pevnou buněčnou stěnou, jako jsou houby, například kvasinky

Naopak při izolaci plazmidové DNA se využívá toho, že při lýzi buněk a následném sražení proteinů je chromozomální DNA zachycena mezi sraženými proteiny a jednoduchou centrifugací je možno odstranit většinu nečistot. Rozpustná frakce obsahující malé kruhové molekuly plasmidové DNA se následně oddělí a srážením se z ní izoluje DNA.

Odkazy

Literatura

  • VONDREJS, Vladimír; STORCHOVÁ, Zuzana. Genové inženýrství, I. Praha: Karolinum, 1997. 

Související články

Externí odkazy

Reference

  1. ↑ DAHM, Ralf. Discovering DNA: Friedrich Miescher and the early years of nucleic acid research. Human Genetics. NaN-NaN-NaN, roč. 122, čís. 6, s. 565–581. DOI 10.1007/s00439-007-0433-0. 

Read other articles:

FirstPlay

Online video game magazine This article's factual accuracy may be compromised due to out-of-date information. Please help update this article to reflect recent events or newly available information. (December 2011) FirstPlayDeveloperFuture PublishingTypeVOD/online magazineLaunch date8 April 2010[1]Platform(s)PlayStation 3WebsiteFirstPlay FirstPlay was a video gaming online magazine published by Future Publishing for Sony Computer Entertainment Europe. It was produced by the team behin...

 

Khu Lambeth của Luân Đôn

Khu Lambeth của Luân Đôn—  Khu tự quản Luân Đôn  — Lambeth trong Đại Luân ĐônKhu Lambeth của Luân ĐônQuốc gia có chủ quyềnVương quốc Liên hiệp Anh và Bắc IrelandQuốc gia lập hiếnAnhVùngLuân ĐônHạt nghi lễĐại Luân ĐônTư cáchKhu tự quản Luân ĐônTổng hành dinhBrixtonSáp nhập1 tháng 4, 1965Đặt tên theoLambeth Thủ phủLambeth Chính quyền • KiểuHội

 

Arthur von Weinberg

Arthur von Weinberg (um 1910) Arthur Weinberg, ab 1908 von Weinberg, (* 11. August 1860 in Frankfurt am Main; † 20. März 1943 im KZ Theresienstadt) war ein deutscher Chemiker und Unternehmer. Er war u. a. Teilhaber der Cassella Farbwerke Mainkur, Aufsichts- und Verwaltungsratsmitglied der I.G. Farbenindustrie AG und ein bedeutender Mäzen und Stifter wissenschaftlicher und kultureller Einrichtungen. 1930 wurde er Ehrenbürger von Frankfurt am Main. In der Zeit des Nationalsozialismus ...

Carl-von-Weinberg-Park

Büste Weinbergs am westlichen Eingang des Parks Der Waldspielpark Carl-von-Weinberg, meist kurz Carl-von-Weinberg-Park genannt, ist mit etwa 10,1 ha einer der mittelgroßen Parks der Stadt Frankfurt am Main, gelegen im südmainischen Stadtteil Niederrad am nördlichen Rand des Frankfurter Stadtwaldes. Der Park ist nach dem in Frankfurt am Main geborenen Unternehmer und Stifter Carl von Weinberg benannt. Inhaltsverzeichnis 1 Geschichte 2 Lage und heutige Nutzung 3 ÖPNV-Anbindung 4 Weblinks 5...

 

آلان جرينسبان

آلان جرينسبان (بالإنجليزية: Alan Greenspan)‏  معلومات شخصية الميلاد 6 مارس 1926 (العمر 97 سنة) ممدينة نيويورك مواطنة الولايات المتحدة  عضو في الجمعية الأمريكية للفلسفة،  ومجموعة الثلاثين،  وحركة الموضوعية  الزوجة أندريا ميتشيل (1997–)  مناصب رئيس مجلس المحافظين للنظام �...

 

Water supply and sanitation in Singapore

Singapore: Water and Sanitation Data Access to an improved water source 100%[1] Access to improved sanitation 100%[1] Continuity of supply (%) 100[1] Average urban water use (liter/capita/day) 148 (2016)[2][3] Average urban domestic water and sewer tariff per m3 US$2.00 (S$2.74, 2023, for a consumption of 10m3 per month)[4] Share of household metering 100% Annual investment in water supply and sanitation US$609 million (2010), or $117/capita/yea...

ピアノソナタ第27番 (ハイドン)

ポータル クラシック音楽 ハイドンの肖像画（トーマス・ハーディ作、1791年） ピアノソナタ第27番 ト長調 作品14-1 Hob. XVI:27 は、フランツ・ヨーゼフ・ハイドンが作曲したピアノソナタ。ランドン版では第42番となっている。 概要 本作品は1774年から1776年の間に作曲され、1778年に出版されたとされている[1][2]。第27(42)番から第32(47)番の6曲はハイドンの最�...

 

Minister responsible for the Civil Service (Manitoba)

Minister responsible for the Public Service CommissionIncumbentAdrien SalaManitoba Public Service CommissionMember ofExecutive Council of ManitobaConstituting instrument The Civil Service Act The Public Service Act The Minister responsible for the Public Service Commission is the Manitoba cabinet minister responsible for the Public Service. The Manitoba Public Service Commission (PSC; French: Commission de la fonction publique) is the independent and impartial department responsible for leadi...

 

Réaumur - Sébastopol (métro de Paris)

Pour les articles homonymes, voir Réaumur. Réaumur - Sébastopol Quai de la ligne 4 vers Porte de Clignancourt. Localisation Pays France Ville Paris Arrondissement 2e, 3e Coordonnéesgéographiques 48° 51′ 58″ nord, 2° 21′ 09″ est Caractéristiques Position parrapport au sol Souterraine Voies 4 Quais 4 Nombre d'accès 4 Accessibilité Non Zone 1 (tarification Île-de-France) Transit annuel 3 579 544 (2021) Historique Mise en service 19 novem...

Jeanneke Pis

Fountain in Brussels, Belgium Jeanneke PisLocation within BrusselsArtistDenis-Adrien DebouvrieYear1985 (1985): creation1987 (1987): erectionTypeBronzeDimensions50 cm (20 in)LocationCity of Brussels, Brussels-Capital Region, BelgiumCoordinates50°50′54.5″N 4°21′14.5″E / 50.848472°N 4.354028°E / 50.848472; 4.354028 Jeanneke Pis (Dutch for 'Little Pissing Joan'; Dutch: [ˌʒɑnəkə ˈpɪs]) is a modern fountain sculpture...

 

Knight Rider (season 1)

Season of television series Knight RiderSeason 1DVD coverCountry of originUnited StatesNo. of episodes22ReleaseOriginal networkNBCOriginal releaseSeptember 26, 1982 (1982-09-26) –May 6, 1983 (1983-05-06)Season chronologyNext →Season 2 List of episodes The first season of Knight Rider, an American television series, debuted on September 26, 1982, and ended on May 6, 1983. It aired on NBC.[1] The region 1 DVD was released on August 3, 2004.[2] Knight Ride...

 

2000 Finnish presidential election

2000 Finnish presidential election ← 1994 16 January 2000 (first round)6 February 2000 (second round) 2006 →   Candidate Tarja Halonen Esko Aho Party SDP Centre Popular vote 1,644,532 1,540,803 Percentage 51.63% 48.37%   Tarja Halonen   Esko Aho  Elisabeth RehnFirst round results by province  Tarja Halonen  Esko AhoSecond round results by province President before election Martti Ahtisaari SDP Elected President ...

Dragon View

This article needs additional citations for verification. Please help improve this article by adding citations to reliable sources. Unsourced material may be challenged and removed.Find sources: Dragon View – news · newspapers · books · scholar · JSTOR (July 2013) (Learn how and when to remove this template message) 1994 video gameDragon ViewIn-game title screenDeveloper(s)Kotobuki SystemPublisher(s)JP: Kotobuki SystemNA: KemcoPlatform(s)Super NESRelea...

 

Salon (Paris)

Art exhibition periodically held in Paris from 1667 to the late 19th century Formally dressed patrons at the Salon in 1890. 'Un Jour de vernissage au palais des Champs-Élysées by Jean-André Rixens featuring Tigresse apportant un paon à ses petits by Auguste Cain. The Salon (French: Salon), or rarely Paris Salon (French: Salon de Paris [salɔ̃ də paʁi]), beginning in 1667[1] was the official art exhibition of the Académie des Beaux-Arts in Paris. Between 1748 and 1890 i...

 

Nguyễn Đình Lập

Nguyễn Đình Lập Thông tin cá nhân Ngày sinh 2 tháng 9 năm 1986 (37 tuổi) Nơi sinh    Thành phố Ninh Bình, Ninh Bình, Việt Nam Chiều cao 1,86 m (6 ft 1 in) Bật đà: 338, Bật chắn: 330 Vị trí Phụ công CLB chuyên nghiệp1 Năm CLB Trận (Bàn)* 2004-200620132007-2015 Trẻ Ninh BìnhĐội tuyển quốc gia Việt NamTràng An Ninh Bình     Đội tuyển quốc gia 2013 Việt Nam 03 lần Sự...

Sico Pass

Sico PassElevation4,092 m (13,425 ft)[1]LocationArgentina–Chile borderRangeAndesCoordinates23°50′S 67°15′W / 23.833°S 67.250°W / -23.833; -67.250[1] Sico Pass (Spanish: Paso de Sico) is a mountain pass on the border between Argentina and Chile. The pass is located on the main divide of the Andes. Administratively, it separates the province of Salta in Argentina and the region of Antofagasta in Chile. The pass is served by Chile Route 23, here ...

 

Halo 4: Forward Unto Dawn

2012 film by Stewart Hendler Halo 4: Forward Unto DawnVisual ID poster with characters from left:Sullivan, Orenski, Master Chief, Lasky, SilvaGenreActionMilitary Sci-fiWritten by Aaron Helbing Todd Helbing Directed byStewart HendlerCreative directorJackson ThorpePresented byElliott SmithStarring Thom Green Anna Popplewell Enisha Brewster Osric Chau Kat de Lieva Daniel Cudmore Mike Dopud Masam Holden Ayelet Zurer Iain Belcher ComposersNeil DavidgeNathan LanierCountry of originUnited StatesOrig...

 

Oh Iboe

1938 filmOh IboeTheatrical posterDirected byThe Teng ChunProduced byThe Teng ChunStarring Lo Tjin Nio Bissu CinematographyThe Teng LiongProductioncompanyJava Industrial FilmRelease datec. 1938 (1938) (Dutch East Indies) CountryDutch East Indies (now Indonesia)LanguageMalay Oh Iboe (Perfected Spelling: Oh Ibu; literally Oh Mother) is a 1938 film from the Dutch East Indies. Directed by The Teng Chun and starring Lo Tjin Nio and Bissu, it followed a suffering of a family after the matri...

Sant'Emidio Rosso

Roman Catholic church in Ascoli Piceno, Italy You can help expand this article with text translated from the corresponding article in Italian. (November 2009) Click [show] for important translation instructions. View a machine-translated version of the Italian article. Machine translation, like DeepL or Google Translate, is a useful starting point for translations, but translators must revise errors as necessary and confirm that the translation is accurate, rather than simply copy-pastin...

 

Rory Williams

Fictional character in the TV series Doctor Who Fictional character Rory WilliamsDoctor Who characterArthur Darvill as Rory WilliamsFirst appearanceThe Eleventh Hour (2010)Last appearanceThe Angels Take Manhattan (2012)Portrayed byArthur DarvillEzekiel Wigglesworth (young)Duration2010–2012In-universe informationAliasLast CenturionAffiliationEleventh DoctorSpouseAmy PondChildren Melody Pond Anthony Williams[1] RelativesThe Doctor (child-in-law)Home eraEarly 21st century Rory Williams...

 
Kembali kehalaman sebelumnya