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Donald Pleasence naît en Angleterre le 5 octobre 1919, dans le comté de Nottinghamshire. Son grand-père est employé aux chemins de fer où il travaille aux rapports, son père, Thomas Stanley Pleasence, y est chef de gare, comme son frère, et sa mère, Alice, née Armitage, est femme au foyer.
Adolescent, rêvant depuis l'enfance de devenir comédien, Donald réussit l'examen d'entrée à la Royal Academy of Dramatic Art. Mais, n'obtenant pas la bourse permettant de financer ses études, il doit renoncer à intégrer cette école. Pour subsister, il rejoint son père comme commis à la gare de Swinton (Yorkshire du Sud), mais ne renonce pas à son rêve. À partir de 1939, il va devenir assistant-régisseur au sein d'un théâtre de Jersey où il parvient, à vingt ans, à devenir comédien. C'est dans une adaptation du roman Les Hauts de Hurlevent qu'il débute au théâtre, remportant un franc succès, et trois ans plus tard monte sur les planches à Londres.
En 1942, Pleasence joue dans La Nuit des rois de William Shakespeare, mais sa carrière est interrompue par la guerre. Lui qui est objecteur de conscience se ravise et rejoint la Royal Air Force. Lors d'une mission, son avion est abattu par la DCA au-dessus du territoire français et il est capturé, torturé et restera plusieurs mois détenu dans un camp de prisonniers. Libéré grâce à l'avance des forces alliées, il se remet de ses épreuves avant d'être rapatrié et regagne l'Angleterre en 1946.
De retour à la vie civile, pour oublier les sévices subis et les horreurs de la guerre, Donald Pleasence se jette à corps perdu dans son métier d'acteur. Il débute à Londres dans Les Frères Karamazov de Dostoïevski, une pièce mise en scène par Peter Brook. Puis il partage l'affiche avec Laurence Olivier et Vivien Leigh, à l'Old Vic Theatre, dans Antoine et Cléopâtre de Shakespeare et enchaîne en leur compagnie une tournée aux États-Unis.
En 1952, Donald Pleasence se tourne vers le petit écran, car il est insatisfait de sa carrière théâtrale malgré son succès, et il participe aux premières émissions de la télévision britannique dans les dramatiques de la BBC. C'est au cinéma qu'il va révéler l'étendue de son incroyable talent, servi par un inquiétant profil et son visage glacé marqué d'un regard bleu intense. Devenu familier du grand public, il est décrit par la critique comme « l'homme au regard hypnotique ». Jusqu'au milieu des années 1950, il incarne des personnages plutôt sympathiques, mais petit à petit sa personnalité se dessine. Au cours de sa prolifique carrière, il jouera les fourbes, les infâmes, les psychopathes, avec un accent sinistre.
Mais sa réussite lui a donné l'habitude d'un certain train de vie qu'il va devoir entretenir en interprétant aussi des rôles alimentaires. S'il assume le fait de jouer pour de l'argent, ses choix ne sont pas toujours heureux. Et il apparaît dans quelques nanars où sa consternation pour ce qu'on lui fait jouer est perceptible.
En 1978, il a failli refuser le rôle du psychiatre Loomis dans la saga des Halloween, six films d'horreur dont l'opus initial La Nuit des masques signé John Carpenter. Et c'est un rôle qu'il a eu raison d'accepter, car il lui vaut d'être nommé pour un Saturn Award du meilleur acteur et va lui assurer une fin de carrière dorée. Aussi, pour John Carpenter, il incarne le Président des États-Unis dans New York 1997 avec Kurt Russell, film sorti en 1981, puis celui du prêtre Loomis enquêtant sur les agissements d'une secte maléfique dans Prince des ténèbres en 1986.
Dans les années 1990, d'un âge avancé, il ralentit son activité. Il apparaît dans le dernier volet d'Halloween 6 sorti en 1995, reprenant une dernière fois son rôle du psychiatre chasseur de tueur, et dans le piteux thriller italien Fatal frames(it) de Al Festa. Donald Pleasence ne verra aucun des deux films, car il meurt le 2 février 1995 dans sa propriété de Saint-Paul-de-Vence, dans le sud de la France, à la suite de complications d'une opération à cœur ouvert.
Bien qu'interprète majoritairement de personnages monstrueux, Donald Pleasence a pu faire apparaître sa sensibilité en enregistrant des histoires pour enfants ayant pour label Atlas Record. Et il est aussi auteur d'un livre pour enfants intitulé Scouse the Mouse et paru en 1977, d'où est issu un album dont plus de la moitié des chansons sont interprétées par Ringo Starr, l'ex-batteur des Beatles.
Marié quatre fois, il est père de cinq filles nées de ses trois premiers mariages. De son union de 1941 à 1958 avec l'actrice Miriam Raymond, sa première épouse, sont nées Angela et Jean. De son union avec la seconde de 1959 à 1970, Joséphine Crombie, chanteuse et actrice, son nées Lucy et Polly. Et de son union de 1970 à 1988 avec la troisième, l'actrice Meira Shore, est née Miranda. En 1989, il épouse en quatrièmes noces Linda Kentwood et ils resteront unis jusqu'au décès de l'acteur, le 2 février 1995, à l'âge de 76 ans.
1962 : The Changing of the Guard (La Relève de la garde), épisode 37, Saison 3 de La Quatrième Dimension (The Twilight Zone) (série télévisée) : Professeur Ellis Fowler
1963 : Au-delà du réel (The Outer Limits) (série télévisée) : Harold J. Finley